F: Optimasi Metode Melanin Bleaching Dalam Meningkatkan Analisis Melanoma Maligna

Abstract

Latar Belakang: Melanoma maligna merupakan tumor ganas yang sangat agresif. Pewarnaan imunohistokimia (IHK) sangat dibutuhkan dalam banyak penelitian, terkadang untuk diagnostik. Berbeda dengan tumor lain, melanoma memiliki pigmen melanin yang dapat menyulitkan penilaian IHK yang menggunakan pewarnaan DAB karena menghasilkan warna kecoklatan. Maka sangat dibutuhkan metode melanin bleaching untuk mengevaluasi lesi melanoma. Tujuan: mengetahui metode melanin bleaching yang optimal untuk analisis melanoma, khususnya pewarnaan IHK. Metode: Penelitian ini menggunakan 18 sampel melanoma maligna. Percobaan awal dengan 0,5% H₂O₂ dalam PBS dibandingkan dengan buffer Tris-HCl pada suhu 80°C, selama 4, 8, dan 12 menit (protokol 1). Selanjutnya, 5% H₂O₂ dalam PBS diuji pada suhu 50°C selama 60, 90, 120 menit (protokol 2), dan selama 24 jam pada suhu ruangan (protokol 3). Integritas jaringan dan efikasi melanin bleaching dievaluasi secara mikroskopis, dilanjutkan dengan pewarnaan IHK HMB45. Hasil dan Diskusi: Pada protokol 1 buffer Tris-HCl dan PBS menghasilkan kerusakan morfologi yang signifikan. Protokol 2 dapat menghilangkan melanin, dan mencapai hasil optimal dalam 60 menit dan 90 menit dengan struktur jaringan yang terjaga, sedangkan 120 menit menyebabkan lepasnya jaringan. Pada suhu ruangan selama 24 jam menunjukkan hasil yang optimal, disertai kerusakan jaringan parsial. Pewarnaan IHK terwarnai dengan baik pada 5% H₂O₂ selama 60 dan 90 menit. Kesimpulan: Ekspresi melanin yang paling sedikit disertai kualitas jaringan paling baik yaitu pada 5% larutan H₂O₂ dalam PBS, suhu 50^oC setelah 60 menit, 90 menit, dan suhu ruangan selama 24 jam. Sementara itu, ekspresi IHK HMB45 yang paling banyak disertai kualitas jaringan paling baik yaitu pada suhu 50^oC selama 60 menit dan 90 menit.

Kata Kunci: melanin bleaching, imunohistokimia, melanoma maligna